เอนไซม์ที่ จำกัด คือเอนไซม์ที่ตัดทั้ง DNA เดี่ยวและคู่ เอนไซม์แต่ละตัวมีลำดับนิวคลีโอไทด์ที่เฉพาะเจาะจงเรียกว่าไซต์ข้อ จำกัด เพื่อตรวจจับและตัดตัว เอนไซม์ที่ใช้ในการยับยั้งจะใช้สำหรับการทำ DNA sequencing, mutational analysis และการโคลนและการขยาย DNA นักวิทยาศาสตร์ใช้เอนไซม์ที่ จำกัด ในการแทรกยีนที่น่าสนใจเข้าไปในเวกเตอร์การแสดงออกโมเลกุลดีเอ็นเอที่สามารถทำซ้ำแยกต่างหากจากดีเอ็นเอของโครโมโซม เวกเตอร์ที่มียีนที่น่าสนใจสามารถนำมาใช้ในสายพันธุ์แบคทีเรียเพื่อแสดงออกและลักษณะโปรตีนได้
วิดีโอประจำวัน
ขั้นตอนที่ 1
ระบุไซต์เอนไซม์ที่ จำกัด บนเวกเตอร์ของคุณโดยดูจากแผนที่ข้อ จำกัด แผนที่ข้อ จำกัด จะบอกคุณว่าเอนไซม์ไหนจะตัดเวกเตอร์ของคุณและที่ไหน
ขั้นตอนที่ 2
เลือกเอนไซม์ที่มีข้อ จำกัด ที่มีส่วนแทรกอยู่ในยีนของคุณด้วยการดูลำดับของเม็ดใส่ ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไซต์ข้อ จำกัด อยู่ในตำแหน่งบนส่วนแทรกของคุณซึ่งอยู่นอกยีนที่น่าสนใจดังนั้นคุณจึงไม่สูญเสียส่วนใดส่วนหนึ่งของยีน
ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีข้อ จำกัด ในการ จำกัด พื้นที่ของยีนหรือเวคเตอร์ การทำเช่นนี้จะทำให้เกิดบาดแผลในดีเอ็นเอของคุณและทำให้ข้อมูลที่ทำให้เข้าใจผิด
ขั้นตอนที่ 4
ลองเลือกเอนไซม์ที่ จำกัด ด้วยปลายเหนียวมากกว่าปลายทื่อ ปลายเหนียวเกิดขึ้นเมื่อเอนไซม์ตัดดีเอ็นเอแบบคู่ขนานในลักษณะที่โฉบเฉี่ยวออกจากสิ่งที่แขวนอยู่ข้างเดียวที่อำนวยความสะดวกในสิ่งที่แนบมาด้วยการตัดแทรกในลักษณะที่ตรงกันข้าม ปลายทู่เกิดขึ้นเมื่อดีเอ็นเอแบบสองขาที่ถูกตัดออกไปอย่างราบรื่นและยากต่อการยึดติด
เลือกเอนไซม์การ จำกัด ที่แตกต่างกันสำหรับปลายทั้งสองด้านของเม็ดใส่ของคุณเพื่อให้แน่ใจว่าใส่ลงในเวกเตอร์ในทิศทางที่ถูกต้องและเพื่อให้แน่ใจว่าเวกเตอร์ไม่ยึดติดกับตัวเองอีกครั้ง
ขั้นตอนที่ 6
ลองเลือกเอนไซม์ที่มีข้อ จำกัด 2 ชนิดซึ่งทำงานได้ดีในระบบบัฟเฟอร์เดียวกันและอุณหภูมิ ถ้าไม่สามารถทำได้ให้เรียกใช้การย่อยอาหารแต่ละอย่างแยกกัน
สิ่งที่คุณจะต้อง
ลำดับของการแทรกยีน
แผนที่ข้อ จำกัด สำหรับเวกเตอร์ของทางเลือก
- รายชื่อเอนไซม์ข้อ จำกัด และเว็บไซต์ตัด
- เคล็ดลับ
- บางโปรแกรมบนเว็บได้รับการพัฒนาเพื่อระบุ ไซต์ที่มีข้อ จำกัด ในลำดับดีเอ็นเอได้อย่างรวดเร็ว หนึ่งในโปรแกรมดังกล่าวมาจาก New England BioLabs
